先导科普荟 | 鼠脑立体定位侧脑室注射，助力中枢神经系统疾病模型探索 发布时间：2023-12-28

脑立体定位技术是研究脑结构和功能必不可少的实验手段。该技术使用脑立体定位仪作为定位仪器，利用颅骨外标志如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢状缝或其它参考点所规定的三维坐标系统，来确定皮层下某些神经核团或脑区的位置，再通过手术方式干预目标位置，在非直视暴露下对其进行定向的刺激、破坏、注射药物等研究。在新药研发中，脑定位注射通常被用作脑部给药手段，用于研究药物在大脑中分布、药物对神经系统的影响以及药物治疗效果，比如：神经科学研究中阿尔茨海默症等模型，可以通过侧脑室给小鼠注射神经递质激动剂，以研究神经递质对行为和认知的调控机制。

脑定位注射利用脑立体定位仪直接将药物注入脑室内。相比其他注射方式靶向性强，侵入性也强，对操作环境及操作者具有较高要求。考虑术后小鼠饲养观察，操作需在屏障系统内，操作精细且耗时漫长，术后可搭配行为学评分以评估受试物急性毒性，对操作者的耐力和精细程度是极大的考验。

图1 实验环境

小鼠脑定位注射实验操作：

实验小鼠经异氟烷吸入麻醉。小鼠头部备皮，碘伏消毒液擦拭消毒。

麻醉后的小鼠固定于脑立体定位仪，具体操作为小鼠上门齿卡入横杆，调节旋钮压紧鼻杆；将耳杆插入小鼠耳道，平衡调节左、右耳杆，使小鼠两耳间连线与耳杆在同一直线上，保证左、右耳杆的刻度位置相同后调节旋钮锁紧耳杆。小鼠固定完好的判断标准：鼻对正中，头部不动，提尾不掉，调整颅骨水平。以上操作过程中异氟烷持续吸入。

眼科剪纵向剪开小鼠头部皮肤约1cm，用镊子沿颅骨表面剥离骨膜结缔组织并剪除，用无菌棉球蘸去浸出的血液，将颅骨表面清理干净，暴露前后囟。

调节脑定位仪上横纵坐标旋钮使牙科微孔钻位于前囟点上方并轻触该点，以Bregma点作为三维坐标系的参考点（零点）。调节X轴及Y轴旋钮移动操作臂到坐标位置，使用微孔牙科钻缓慢打孔。颅骨钻穿时有明显落空感，此时应小心操作避免伤及硬脑膜。固定微量注射器，调节Z轴旋钮使微量注射器针头插入侧脑室。进行缓慢注射，注射速度1μL/min，注射剂量视具体实验而定，一般在5μL左右。

图2 小鼠脑定位注射

注射完成后留针静置一段时间以便药液充分吸收。缓慢调节Z轴旋钮向上拔出针头。缝合皮肤，完成脑定位注射。

成都先导已引进脑立体定位仪，并熟练掌握脑立体定位注射技术，已完成数百只小鼠的脑部给药、脑胶质瘤模型造模。

图3 脑定位注射应用于脑胶质瘤药效模型

成都先导已经建立了从靶点验证到临床开发的一体化成药性评价平台体系，可以提供包括体外生物学、in vitro ADME、DMPK、体内药理药效、non-GLP毒理、CMC开发等技术服务，并且已广泛应用于客户和内部管线新药项目研发过程中，可利用团队的新药研发经验更好地服务于客户的成药性评价需求，在过去的两年中已广泛地开展并成功交付了国内外多个客户服务项目。欲了解更多信息，欢迎咨询成都先导。